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黑色素瘤細胞株應謹慎對待

更新時間:2015-07-26      點擊次數:2083
   黑色素瘤細胞株是從一個經過生物學鑒定的細胞系或原代培養物用單細胞分離培養或通過篩選的方法,克隆具有特殊性質或標志的單細胞獲得的細胞群,稱細胞株。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。描述一個黑色素瘤細胞株時,必須說明它的特殊性質或標志。與細胞系類似,如果不能繼續傳代或傳代代數有限,可稱為“有限細胞株(finitecellstrain)”。如果可以連續傳代,則可稱為“連續細胞株(continouscellstrain)”。再由原細胞株進一步分離培養出與原株性狀不同的細胞群,可稱為亞株(substrain)。克隆(clone)則為黑色素瘤細胞株的一種特殊情況,指由一個細胞增殖所形成的群體。
 
  黑色素瘤細胞株是實驗中非常常用的一個細胞株,在生物制藥中使用也非常廣泛。該細胞株培養條件簡單,貼壁強度適中,比較容易轉染,很適合用它來研究一般哺乳動物基因的功能。
 
  黑色素瘤細胞株對于更換培養基,應謹慎對待,更換培養基時,應留一瓶細胞使用推薦的培養基培養,留作種子。更換培養基有兩種方法,zui簡單的方法是直接更換培養基,強制使細胞適應新的培養基;還有一種更溫和的方法:傳代細胞的時候分成細胞兩瓶,*瓶使用原來推薦的培養基,第二瓶使用50%原來推薦的培養基,50%新的培養基,之后仔細觀察黑色素瘤細胞株的生長狀態,如果第二瓶細胞生長狀態不好,應立即停止更換培養基,如果第二瓶生長狀態好,可以繼續傳代分瓶,一瓶使用50%原來推薦的培養基,50%新的培養基,另一瓶使用25%原來推薦的培養基,75%新的培養基,繼續觀察,如果細胞狀態好,可以全部換成新鮮的培養基。
 
  黑色素瘤細胞株在培養瓶長成致密單層后,已基本上飽和,為使細胞能繼續生長,同時也將細胞數量擴大,就必須進行傳代(再培養)。傳代培養也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以,而貼壁細胞需經消化后才能分瓶。一般使用蛋白水解酶(比如胰蛋白酶)消化貼壁細胞成單個黑色素瘤細胞株,也可加入乙二胺四乙酸(EDTA)提高消化能力,EDTA是一種二價離子的螯合劑,能抑制細胞膜上的Ca2+和Mg2+。常用的細胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03%(w/v)EDTA,一般用不含Ca2+和Mg2+的鹽溶液配置,先用胰酶-EDTA消化液清洗細胞(5.0-10.0ml/75cm),然后棄去消化液,重新加入少量的胰酶-EDTA消化液(2.0to5.0ml/75sq.cmflask),觀察細胞直到細胞變圓脫離瓶壁,此過程一般需要5-15分鐘,為了避免細胞成團,消化細胞的過程中不要拍打細胞瓶。對于特別難消化的黑色素瘤細胞株,可以加入胰酶EDTA消化液后把細胞置于37°C促進消化,細胞脫離瓶壁后,立刻加入含有血清的*培養基中止消化,血清中某些蛋白質能夠抑制胰酶的活性。一般情況下,離心并不需要。如果細胞需要無血清或者低血清的培養基,可以以125000g轉速離心5分鐘,然后棄去中止用的培養基,加入適合的新的培養基輕輕混勻細胞,移入到新的培養瓶。傳代的比例視細胞類型而定,一般是1:2-1:20,具體比例可參考說明書。胰蛋白酶會對某些黑色素瘤細胞株的細胞膜產生損傷,對于這種類型的細胞,可用細胞刮輕輕刮下細胞,加入適量的培養基,輕輕吹打混勻細胞,然后進行傳代培養。
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